O método CHOD-PAP é um método enzimático amplamente utilizado para determinar os níveis de colesterol no sangue. Envolve uma série de reações enzimáticas que são acopladas à produção de um produto colorido, que é medido espectrofotometricamente. Aqui está um colapso das principais reações envolvidas:
1. Hidrólise do éster de colesterol: -
colesterol esterase (CE) hidrolisa os ésteres de colesterol em colesterol livre e ácidos graxos.
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Éster de colesterol + h2o → colesterol + ácido graxo
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2. Oxidação do colesterol: -
colesterol oxidase (chod) Oxida o colesterol livre em Cholest-4-en-3-one e peróxido de hidrogênio (H2O2).
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Colesterol + O2 → Cholest-4-en-3-one + H2O2
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3. Reação de peroxidase: -
peroxidase (pod) Catalisa a reação entre H2O2 e um substrato cromogênico,
4-aminofenazona (4-AP) , na presença de um fenol, tipicamente
fenol 4-aminoantipirina (Pap) . Isso resulta na formação de um corante de quinoneimina colorido.
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H2O2 + 4-AP + Pap → Dye Quinoneimina + H2O
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Pontos de chave: *
Reações acopladas: As reações são acopladas, o que significa que o produto de uma reação serve como substrato para o próximo. Isso garante que a formação do produto colorido seja diretamente proporcional à concentração inicial de colesterol.
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medição espectrofotométrica: A intensidade do produto colorido é medida usando um espectrofotômetro em um comprimento de onda específico. A absorvância é diretamente proporcional à concentração de colesterol.
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Calibração: O método requer uma curva de calibração usando padrões conhecidos de colesterol para relacionar as leituras de absorvância às concentrações de colesterol.
Vantagens do método Chod-PAP: *
alta sensibilidade e precisão *
relativamente simples e rápido *
amplamente disponível e padronizado Desvantagens do método Chod-PAP: *
pode ser afetado pela lipemia (altos níveis de triglicerídeos) e hemólise *
requer reagentes e equipamentos especializados No geral, o método CHOD-PAP é um método confiável e preciso para medir os níveis de colesterol no sangue. É amplamente utilizado em laboratórios clínicos e é considerado o padrão -ouro para a determinação do colesterol.
