Enterobacter aerogenes e outras espécies de Enterobacteriaceae são fáceis de identificar usando o kit de teste API-20E. Este kit, fabricado pela bioMeriuex Inc., inclui 20 mini-tubos ou poços para o teste. O teste consiste em inocular uma suspensão bacteriana pura nos poços de teste e ler as reações de cor que ocorrem. A identificação depende da conversão dos resultados dessas reações de cores em um código de sete dígitos conhecido como Índice de Perfil Analítico. A correspondência deste código com o banco de dados do fabricante fornece uma identificação do organismo.
Isole o organismo que você deseja identificar em um meio de cultura específico para Enterobacteriaceae. Use o kit de teste API 20E apenas com culturas puras e não diretamente em amostras de culturas mistas.
Abra uma ampola contendo 5 ml de meio de cloreto de sódio a 0,85 por cento. Remova uma única colônia de uma placa de isolamento de 18 a 24 horas de idade com uma pipeta e adicione-a na ampola. Misture para obter uma suspensão homogênea. Use esta suspensão assim que terminar de prepará-la.
Instale uma caixa de incubação que consista em poços perfurados em uma bandeja com tampa. Abra a caixa e adicione 5 ml de água desmineralizada ou destilada nos poços da bandeja. Desembale a tira fornecida no kit de teste API 20E e coloque-a na caixa de incubação.
Encha o tubo e a cúpula dos poços marcados com "GEL", "VP" e "CIT" com a suspensão que você ter preparado. Nos poços restantes, encha a suspensão bacteriana no tubo, mas não na cúpula. Adicione óleo mineral nos poços marcados com "ADH", "ODC", "LDC", "URE" e "H2S" para criar um ambiente anaeróbico.
Cubra a caixa de incubação com a tampa e incube a uma temperatura entre 34 e 38 graus Celsius por 18 a 24 horas.
Observe os poços e observe as reações na folha de resultados. Desde que um mínimo de três testes sejam positivos, prossiga para as reações de cor usando as soluções de teste químico, ou reagentes, que acompanham o kit. Adicione uma gota de reagente TDA no poço marcado "TDA" e uma gota de cada reagente VP1 e VP2 em "VP" bem marcado. Se menos de três testes forem positivos, incube as tiras por mais 24 horas antes de adicionar esses reagentes.
Observe as mudanças de cor produzidas nos poços. Uma cor marrom avermelhada no TDA indica uma reação positiva. Aguarde 10 minutos após a adição de reagentes do kit em VP1 e VP2. Considere uma cor vermelha ou rosa como positiva e uma cor rosa pálida aparecendo após 10 minutos como negativa.
Adicione uma única gota de reagente JAMES do kit de teste ao poço marcado "IND." Considere uma cor rosada em toda a cúpula como uma reação positiva.
Execute o teste da oxidase conforme especificado pelo fabricante do kit e registre seus resultados junto com os resultados dos 20 testes anteriores.
Use a tabela de leitura fornecida com o kit de teste para alocar valores para as reações observadas em cada um dos poços de teste. Adicione esses valores conforme prescrito para obter o número do perfil de sete dígitos.
Alimente esse número de perfil de sete dígitos no banco de dados do fabricante do kit por meio de um telefone de discagem por tom. Aguarde para receber a identificação fornecida pelo banco de dados. Se o número do perfil não fornecer resultados específicos, execute os testes suplementares especificados pelo fabricante do kit.
