O substrato da fosforilase é o glicogênio .

A fosforilase é uma enzima que decompõe o glicogênio em glicose-1-fosfato. Este processo é conhecido como glicogenólise .

Especificamente, a fosforilase atua nas ligações glicosídicas α-1,4 dentro da molécula de glicogênio, quebrando-os para liberar glicose-1-fosfato.

Existem dois tipos principais de fosforilase:

* Glicogênio fosforilase :Esta é a principal forma de fosforilase encontrada no fígado e nos músculos. É responsável pela quebra do glicogênio para produção de energia.
* Fosforilase de amido :Esta enzima é encontrada nas plantas e decompõe o amido em glicose-1-fosfato.

Ambos os tipos de fosforilase utilizam fosfato inorgânico (Pi) como cofator em suas reações enzimáticas.