Quando se trata de medir o comprimento dos fragmentos de DNA, que são muito menores que as células, os microbiologistas precisam de um truque, e o mais conveniente é a eletroforese em gel. Este método baseia-se no fato de que os fragmentos de DNA são carregados, e é uma alternativa aos métodos mais caros, como a cristalografia de raios X, que foi responsável pela descoberta da estrutura da hélice dupla do DNA.

Como Funciona a Eletroforese em Gel

Como as moléculas de DNA são carregadas, elas são afetadas por uma corrente elétrica. Quando você as coloca em um gel neutro e coloca uma corrente através do gel, as moléculas migram em direção ao eletrodo positivo (ânodo). Como moléculas de DNA de tamanhos diferentes carregam a mesma carga, as menores viajam mais rápido, então esse processo separa as moléculas em bandas que podem ser comparadas a amostras de tamanhos conhecidos.

Um Procedimento Básico de Eletroforese

O gel é normalmente feito de agarose, um polissacarídeo que quando aquecido em uma solução tampão forma um gel semi-sólido, ligeiramente poroso. Em uma extremidade, o gel forma recortes minúsculos chamados poços onde o pesquisador coloca as amostras de DNA em estudo, junto com amostras de referência de comprimento conhecido, chamadas de escada de DNA. Os comprimentos dos fragmentos da escada foram pré-determinados por outro método, como a cristalografia de raios X.

Quando o gel é imerso em uma solução condutora e a voltagem é aplicada, os fragmentos começam a migrar através do gel. os menores primeiro e os maiores, mais lentos por trás. Eles eventualmente se formam em bandas semelhantes ao espectro de acordo com o tamanho.

Uma vez que isso ocorre, o pesquisador desliga a energia, infunde o gel com um corante de ligação a DVA e examina os espécimes sob luz ultravioleta. Usando a escada como referência, o pesquisador pode determinar o tamanho de cada um dos fragmentos em uma faixa visível. Apenas bandas são visíveis - fragmentos de DNA individuais são muito pequenos para serem vistos.

Determinando comprimentos de fragmentos desconhecidos -

Provavelmente, nem todas as bandas em uma amostra fazem pares com uma banda na escada, então Para determinar os tamanhos desses fragmentos desconhecidos, os cientistas geralmente traçam um gráfico. No eixo x é a distância percorrida por cada faixa na escada em milímetros, enquanto no eixo y é o tamanho de cada banda. Quando os pontos são conectados por uma curva, o tamanho de qualquer banda pode ser extrapolado da curva depois de medir a distância percorrida por essa banda em milímetros.