Depois de executar amostras de DNA em um gel de agarose e tirar uma foto, você pode salvar a foto para mais tarde, quando você poderá analisar os resultados e interpretá-los. Os tipos de coisas que você procura dependem da natureza do seu experimento. Se você está fazendo impressões digitais de DNA, por exemplo, você vai querer comparar o tamanho de pedaços de DNA de duas amostras - do suspeito e de uma amostra da cena do crime, talvez. Se você estiver trabalhando com plasmídeos a partir de bactérias, ao contrário, talvez seja necessário certificar-se de que o plasmídeo contenha a inserção. Consequentemente, como você interpreta seu gel dependerá em parte da experiência que você fez. No entanto, existem algumas regras gerais que você pode aplicar.

A partir da parte superior da imagem, meça a distância de cada banda na faixa de "padrões" do seu gel (também conhecido como escada). A faixa de normas contém partes de DNA cujo tamanho já é conhecido, portanto, você já deve saber o tamanho de cada uma antes de iniciar sua experiência. Meça também a distância percorrida pelas bandas em cada uma das faixas da amostra.

Divida a distância de cada padrão e cada banda nas amostras percorre a distância até o fundo do gel. O resultado é chamado de mobilidade relativa. Você pode usar o programa de planilhas para fazer a aritmética para você se tornar essa etapa mais rápida.

Insira a mobilidade e o tamanho relativos de cada padrão em seu programa de planilhas. Em seguida, use a ferramenta gráfica do programa de planilha para criar gráfico desses dados com mobilidade relativa no eixo xe tamanho no y.

Ajustar uma linha ao gráfico usando regressão não linear. Consulte a seção de Ajuda do seu programa de planilhas se precisar saber como fazer isso. Você deve acabar com uma equação, talvez uma semelhante à seguinte:

y = (0.3) x ^ -2.5

Note que x aqui será a mobilidade relativa, enquanto y é o Tamanho. Observe também que sua equação pode ter números completamente diferentes para o expoente e o coeficiente - essa equação é fornecida apenas como um exemplo hipotético.

Leve a mobilidade relativa das bandas de sua amostra e conecte-a como x para calcular o tamanho das partes do DNA nas bandas da amostra.

Suponha que a equação derivada pelo seu programa de planilha era de fato y = (0.3) x ^ -2.5, e a mobilidade relativa de uma determinada banda da amostra era 0,68 . Substituindo 0,68 em sua equação, você encontra o seguinte:

y = (0.3) (0.68) ^ - 2.5

Usando sua calculadora, você aumenta 0,68 para -2,5 e encontra o seguinte:

y = (0.3) (2.62)

y = 0.786

que seria então o tamanho estimado em quilobases do DNA em uma das bandas de sua amostra.

Plasmids

Note que você pode ou não precisar usar as instruções nesta seção. A eletroforese em gel de agarose é freqüentemente usada para confirmar que um plasmídeo contém uma determinada inserção. Se você não está trabalhando com plasmídeos, você pode pular esta seção. Se você é, no entanto, você pode seguir estas instruções.

Observe que se você estiver trabalhando com plasmídeos não cortados ou cortados, você não pode estimar o tamanho usando o procedimento da seção 1 acima. Isso porque os plasmídeos não cortados e cortados migram em taxas diferentes do DNA linear.

Compare o número de bandas em cada pista. Lembre-se de que uma enzima de restrição corta o DNA em locais onde ocorre uma determinada sequência chamada local de restrição. Se uma amostra foi tratada com duas enzimas de restrição, uma banda para a inserção e uma banda para o restante do plasmídeo deve estar presente. Isso porque a inserção será flanqueada por dois locais de restrição, cada um para uma enzima diferente, de modo que cortes em ambos os locais irão liberar a inserção do plasmídeo. Um corte em apenas um local, em contraste, irá converter o plasmídeo em DNA linear. Uma amostra cortada sem enzimas de restrição ou uma enzima de restrição, então, deve apresentar uma única banda, enquanto uma amostra cortada com duas enzimas de restrição deve apresentar duas bandas.

Observe as bandas criadas pelo DNA plasmidial cortado. Um plasmídeo cortado tem um corte em uma única fita, então ele migra mais lentamente que um plasmídeo cortado. Plasmídeos cortados, por sua vez, migram mais lentamente do que o DNA não cortado.

Estime o tamanho da inserção usando o procedimento descrito na Seção 1 e determine se ela corresponde às suas expectativas (que variam dependendo do experimento).