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  • Como calcular o Km

    Nas reações biológicas, as enzimas funcionam de forma muito semelhante aos catalisadores, fornecendo caminhos alternativos para a ocorrência de reações e acelerando o processo como um todo. Uma enzima trabalha dentro de um substrato, e sua capacidade de aumentar a velocidade da reação depende de quão bem ela se liga ao substrato. A constante de Michaelis, denotada por K M, é uma medida da afinidade enzima /substrato. Um valor menor indica uma ligação mais estreita, o que significa que a reação atingirá sua velocidade máxima em uma concentração menor. K M tem as mesmas unidades que a concentração de substrato e é igual à concentração de substrato quando a velocidade da reação é a metade do seu valor máximo.

    O Gráfico de Michaelis-Menten

    A velocidade de uma reação catalisada por enzima é uma função da concentração do substrato. Para derivar um gráfico para uma reação particular, os pesquisadores preparam várias amostras de substrato em diferentes concentrações e registram a taxa de formação do produto para cada amostra. Um gráfico de velocidade (V) vs. concentração ([S]) produz uma curva que sobe rapidamente e se estabiliza na velocidade máxima, que é o ponto no qual a enzima está trabalhando tão rápido quanto possível. Isso é chamado de diagrama de saturação ou gráfico de Michaelis-Menten.

    A equação que define o gráfico de Michaelis-Menten é:

    V = (V máx [S]) ÷ (K M + [S}).

    No ponto em que K M = [S], esta equação reduz para V = V max ÷ 2, portanto K M é igual à concentração do substrato quando a velocidade é metade do valor máximo. Isto torna teoricamente possível ler K M fora do gráfico.

    O Gráfico de Lineweaver-Burk

    Embora seja possível ler K M a partir de um enredo de Michaelis-Menten, não é fácil ou necessariamente preciso. Uma alternativa é traçar o recíproco da equação de Michaelis-Menten, que é (após todos os termos terem sido rearranjados):

    1 /V = ​​{K M /(V max × [ ,null,null,3],S])} + (1 /V max)

    Esta equação tem a forma y = mx + b, onde

  • y = 1 /V

  • x = 1 /S

  • m = K M /V max

  • b = 1 /[S]

  • x-intercepto = -1 /K M

    Esta é a equação que os bioquímicos normalmente usam para determinar K M. Eles preparam várias concentrações de substrato (porque é uma linha reta, eles tecnicamente precisam de apenas dois), plotam os resultados e leem K M diretamente do gráfico.

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