p Nos últimos anos, um método de biópsia não invasivo denominado biópsia líquida tem se mostrado promissor como uma alternativa potencial à biópsia de tecido, atualmente o padrão ouro na detecção e diagnóstico do câncer. Uma amostra de biópsia de tecido - tradicionalmente coletada por meio de um procedimento cirúrgico que pode exigir anestesia geral, acompanhada pelo risco de complicações que podem ocorrer a partir de qualquer cirurgia, desde a dor até infecção e pneumonia - é normalmente testado para variações genéticas específicas, também conhecido como mutações, que pode oferecer informações sobre um tratamento claro e ideal para esse câncer. p Biópsias líquidas, por outro lado, identificar a presença de fragmentos de DNA tumoral ou células circulando em fluidos corporais como sangue, urina ou saliva - chamada de DNA tumoral circulante (ctDNA) - e poupa os pacientes de danos desnecessários. Infelizmente, a quantidade diminuta de ctDNA nos fluidos corporais e sua natureza de vida curta permanecem um desafio para aplicações na vida real.

p Mas pesquisadores de biotecnologia da Universidade de Agricultura e Tecnologia de Tóquio (TUAT) desenvolveram uma técnica de nanopore que, em testes de laboratório, mostrou potencial para oferecer um poderoso, ferramenta rápida e fácil para detecção de mutação.

p As descobertas foram publicadas em 9 de agosto, 2020, no jornal revisado por pares Métodos Pequenos .

p Medições de nanopore, uma tecnologia de sequenciamento genético de terceira geração, passa uma molécula de DNA através de um orifício em escala nanométrica, ou 'poro'. À medida que transita pelo poro, as bases de nucleotídeos de DNA (adenina [A], citosina [C], guanina [G], ou timina [T]) causam mudanças na carga elétrica que são específicas para cada uma dessas bases e que podem ser catalogadas, muito parecido com passar areia por uma série de peneiras. A tecnologia Nanopore também pode sentir a translocação, ou troca de material genético, de filamentos curtos de DNA por meio do bloqueio da corrente elétrica quando o poro está aberto. Em ambos os casos, os tempos de execução de medição de segunda geração duram de 4 a 9 dias. Mas as medições de nanopore ocorrem em tempo real.

p A técnica de nanoporos rápida e barata é frequentemente usada para sequenciamento do genoma inteiro, mas seu uso para análise de ctDNA permanece subdesenvolvido. O sequenciamento de nanopore é especializado em comprimentos de leitura longos (> 10, 000-50, 000 nt). O sequenciamento do ctDNA (~ 150 bp) precisa de um processamento de estágio anterior, como o fornecimento de múltiplas cópias do ctDNA original para alvos ampliados. Embora tenham sido feitas tentativas de abordagens usando tecnologia de nanoporos para detecção direta de ctDNA, e são capazes de reconhecer a presença ou ausência de uma única mutação genética, até aqui, eles foram incapazes de reconhecer a posição dessa mutação.

p O método TUAT, com base na análise estatística do tempo que leva para o código genético descompactar, e do bloqueio da corrente, permitindo que a presença e a posição de uma mutação sejam identificadas. Até agora só foi usado em pequenas tiras de material genético, ou oligonucleotídeos, não em biópsias líquidas do mundo real.

p "Isso ainda está na fase de prova de conceito, mas é empolgante não apenas porque pode permitir a detecção antecipada, "disse Ryuji Kawano, um dos dois engenheiros responsáveis ​​por desenvolver o novo método, “mas a técnica poderia ser usada para avaliar o grau de metástase [crescimento do câncer] para quão bem os medicamentos anticâncer estão funcionando”.

p Os pesquisadores agora esperam trabalhar com instituições médicas para verificar e catalogar a localização de mutações no ctDNA de muitos tipos de câncer diferentes, a fim de desenvolver este método como um método diagnóstico simples para uma ampla gama de ocorrências da doença.