Os químicos usam cromatografia líquida de alta performance, ou HPLC, para separar misturas de compostos. Em geral, o método consiste em injetar uma amostra em uma coluna onde ela se mistura com um ou mais solventes. Compostos diferentes absorvem ou aderem à coluna em diferentes graus; e à medida que o solvente empurra os compostos através da coluna, um dos componentes da mistura sairá da coluna primeiro. O instrumento detecta os compostos quando saem da coluna e produz um cromatograma que consiste em um gráfico com tempo de retenção no eixo xe intensidade de sinal do detector no eixo y. À medida que os compostos saem da coluna, eles produzem “picos” no cromatograma. Em geral, quanto mais distantes e quanto mais estreitos os picos no cromatograma, maior a resolução. Os cientistas consideram uma resolução de 1,0 ou superior para representar uma separação adequada.
Meça a largura de dois picos adjacentes no cromatograma, observando onde os valores do eixo x estão na base de cada pico. O eixo x representa o tempo de retenção, geralmente medido em segundos. Assim, se um pico começa em 15,1 segundos e termina em 18,5 segundos, sua largura é (18,5 - 15,1) = 3,4 segundos.
Determine os tempos de retenção observando o tempo, ou seja, a localização no x- eixo, que corresponde às localizações dos máximos dos picos. Esse valor normalmente estará na metade entre os dois valores usados para calcular a largura na etapa 1. O exemplo dado na etapa 1, por exemplo, exibiria um máximo em cerca de 16,8 segundos.
Calcule a resolução, R , entre dois picos por meio de
R = (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],
onde RT1 e RT2 representam os tempos de retenção dos picos 1 e 2, e W1 e W2 representam as larguras dos picos das suas bases. Continuando o exemplo a partir dos passos 2 e 3, um pico exibe um tempo de retenção de 16,8 segundos e uma largura de 3,4 segundos. Se o segundo pico exibisse um tempo de retenção de 21,4 segundos com uma largura de 3,6 segundos, a resolução seria igual a
R = (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] = 4,6 /3,5 = 1,3.
