O cálculo de títulos de vírus é uma maneira complicada de dizer que um cientista está contando o número de vírus em uma amostra específica. Para calcular os títulos de vírus, os cientistas infectam placas de bactérias em crescimento com soluções virais em concentrações variadas e calculam o número de vírus na solução original contando as bactérias que morreram devido à infecção viral.
Diluições em série
Coloque as luvas, encha 10 tubos de cultura com 9 ml de caldo e marque-os com “10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3”, e assim por diante até “10 ^ - 10. ”Estes tubos serão usados para diluições virais em série. Como os vírus podem atingir concentrações incrivelmente altas, é preciso diluí-los para contá-los de maneira eficaz. Cada tubo representa uma diluição dez vezes maior do vírus.
Pegue 1 ml da cultura de vírus que você deseja titular e transfira-o para o tubo intitulado “10 ^ -1” com uma pipeta. Misture bem o tubo. Esta é a sua primeira diluição de dez vezes.
Pegue 1 ml da cultura mista do seu tubo rotulado “10 ^ -1” e transfira-o com uma nova pipeta para o tubo seguinte, rotulado “10 ^ -2 Misture este tubo também.
Continue esse padrão para criar uma série de diluições em série. Você vai acabar com 9 tubos de 9 ml e 1 tubo de 10 ml. As cargas virais em seus tubos serão diluídas em qualquer lugar de 10 vezes (seu primeiro tubo) ou 100 vezes (seu segundo tubo) a dez bilhões de vezes (seu tubo final).
Preparando Placas
Pegue 10 tubos de agar soft triptona e 10 placas de Petri e rotule-os para corresponderem aos seus tubos de diluição em série.
Solte as tampas para que não saiam no calor e coloque os tubos de ágar em um béquer. de água fervente. Isso irá derreter o agar para que você possa despejá-lo em placas de Petri.
Transfira os tubos para um banho de água quente a um mínimo de 45 graus Celsius. Isso garantirá que seu ágar não se solidifique nos tubos antes que você possa despejá-lo em uma placa de Petri.
Adicione duas gotas de cultura bacteriana ao seu ágar e misture suavemente. Estas são as bactérias que serão mortas, permitindo que você conte o número de partículas de vírus em uma solução particular.
Adicione 1 ml de cada diluição serial ao seu tubo de ágar correspondente, enquanto os tubos ainda estão na água quente banho. Por exemplo, 1 ml de sua diluição serial de 10 ^ -1 deve entrar no tubo de agar rotulado “10 ^ -1”.
Misture cada tubo e, em seguida, despeje cada tubo na placa de Petri com o rótulo correspondente. Isso criará uma fina camada de ágar que foi inoculada com bactérias e vírus em cada placa. Deixe as placas crescerem durante a noite em uma incubadora.
Contando e calculando títulos |
Retire suas placas da incubadora e examine-as. Você deve ver áreas nubladas em toda a placa onde as bactérias cresceram, exceto por pequenos pontos claros chamados placas. Essas placas são manchas de bactérias mortas, e cada placa representa um vírus.
Encontre uma placa que tenha entre 30 e 300 placas e conte o número exato de placas naquela placa.
Pegue a placa. número de placas no seu prato e multiplique por 10. Se você contasse 157 placas, você obteria 1570.
Multiplique o número que você obteve no passo anterior pelo inverso do número no seu tubo de diluição. Por exemplo, se a placa selecionada fosse a placa 10 ^ -5, você multiplicaria 1570 por 10 ^ 5 para obter 157000000. Esse número final é o seu título de vírus e representa o número de vírus por ml de sua cultura original. br>
Aviso
Tenha cuidado ao trabalhar com vírus. Nem todos os vírus são perigosos, mas você deve tomar precauções. Mude suas luvas com freqüência. Limpe imediatamente os derrames e desinfete a área.
