Isolar bactérias do solo é um primeiro passo importante em muitos experimentos microbiológicos. Uma vez isoladas, as bactérias podem ser analisadas para determinar as coisas, como sua espécie e sua função no ambiente do solo. Mesmo uma pequena quantidade de solo pode conter milhões de bactérias, o que torna necessário diluir uma amostra de solo antes de isolar as bactérias da amostra.
Meça 100 ml. água destilada no cilindro graduado e adicioná-lo à garrafa estéril.
Pesar 1 g da amostra de solo e adicioná-lo à garrafa de água destilada. Feche bem o frasco e agite-o para misturar completamente a solução.
Etiquete os tubos de teste estéreis "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" e "10 ^ - 6. " Adicione 9 ml de água destilada a cada um dos tubos, usando uma das pipetas.
Transfira 1 ml da solução no frasco para o tubo rotulado "10 ^ -3", usando uma nova pipeta. Tampe o tubo e agite suavemente até a solução estar bem misturada.
Transfira 1 ml da solução no tubo de ensaio "10 ^ -3" para o tubo "10 ^ -4" com uma nova pipeta. Tampe o tubo "10 ^ -4" e agite para misturar. Repita este método para transferir a solução do tubo "10 ^ -4" para o tubo "10 ^ -5" e depois do tubo "10 ^ -5" para o tubo "10 ^ -6".
Plaque três amostras de cada um dos tubos "10 ^ -4", "10 ^ -5" e "10 ^ -6". Use uma nova pipeta para transferir 1 ml de solução do tubo para uma placa de Petri. Adicione cerca de 15 ml de nutriente ágar à placa; em seguida, coloque a tampa sobre a placa e agite suavemente para que o agar cubra o fundo da placa.
Faça uma placa de controle colocando 1 ml de água destilada em uma placa de Petri, usando uma nova pipeta. Adicionar ágar; coloque a tampa e agite a placa.
Deixe as placas de Petri na posição vertical até que o ágar esteja pronto. Em seguida, inverta as placas e incube-as - seja em uma incubadora ou em temperatura ambiente - por um período tão curto quanto 24 horas e até cinco dias.
Remova as placas da incubadora após a quantidade desejada de tempo de incubação. Conte as colônias bacterianas em placas contendo cerca de 30 a 300 colônias. Use um marcador permanente para marcar as colônias que você já contou para evitar a contagem das mesmas colônias duas vezes.
Divida o número de colônias contadas pela diluição - "10 ^ -4" "10 ^ -5 "ou" 10 ^ -6 "- da solução do solo para cada placa. Encontre o número de bactérias cultiváveis no grama original do solo, calculando a média dos resultados de cada placa contável.
TL; DR (muito longo; não leu)
Siga as técnicas laboratoriais assépticas o procedimento.
Aviso
Para evitar a contaminação e possíveis infecções das bactérias, descarte adequadamente todas as placas de Petri, soluções de solo e pipetas.
Apenas este procedimento mede bactérias cultiváveis. Segundo a Cornell University, entre 90% e 99% das bactérias do solo não crescem em ágar nutriente.
