Tris, ou tris (hidroximetil) aminometano, é um tampão biológico comum, usado em todo o processo de extração de DNA. Durante a extração de qualquer número de fontes, o DNA é sensível ao pH. Durante a lise celular, remoção de componentes celulares indesejados e precipitação, o tris é usado para manter um pH estável. Além disso, ele desempenha um papel particularmente importante na lise celular.

TL; DR (muito longo; não leu)

A extração de DNA é um processo sensível ao pH e o uso de um tampão tris ajuda a manter o pH estável ao longo da lise e extração celular.

Tris como tampão

Como o pH pode influenciar e ser influenciado por vários fatores celulares, manter um pH estável é essencial para a ciência experimental . Os tampões biológicos, como o tris, são importantes porque podem manter um pH estável apesar das influências que poderiam, de outra forma, alterar o pH. Tris (hidroximetil) aminometano, com um pKa de 8,1, é um tampão eficaz entre pH 7 e 9. Devido à sua faixa neutra, o tris é um tampão comumente usado em laboratórios biológicos. No entanto, o tampão tris é sensível à temperatura e deve ser usado na temperatura em que foi originalmente pHed para evitar inexatidão.

Lise de células

Lise, ou quebrar as células, é o primeiro passo de extração de DNA. Isto é conseguido por um tampão contendo tris e EDTA (ácido etilenodiaminotetracético). O EDTA liga-se a catiões divalentes como o cálcio e o magnésio. Como esses íons ajudam a manter a integridade da membrana celular, eliminá-los com EDTA desestabiliza a membrana. Tris é o principal componente de buffering; Seu principal papel é manter o pH do buffer em um ponto estável, geralmente 8.0. Além disso, tris provavelmente interage com o LPS (lipopolissacarídeo) na membrana, servindo para desestabilizar ainda mais a membrana.

Tris protege o DNA das mudanças de pH

Quando as células são quebradas, seu DNA e o conteúdo é derramado no buffer. Além disso, a RNase A (destrói o RNA), proteases (destrói proteínas) e SDS (dodecil sulfato de sódio, solubiliza os fragmentos de membrana) são frequentemente incluídos. Em conjunto, esta sopa de conteúdo celular e RNA e proteínas fragmentados pode ter um grande impacto no pH da solução. Como o DNA é sensível ao pH, é importante que os tris tamponem a sopa e mantenham o pH em um ponto constante.

Precipitação de DNA -

No estágio final de extração de DNA, o próprio DNA é extraído da solução. Neste ponto, o DNA é solúvel no buffer. Para extrair da solução, o DNA é insolúvel adicionando etanol ou isopropanol (álcool isopropílico). Quando isso é feito, o DNA torna-se óbvio em solução como uma substância branca. Embora o ADN possa ser isolado dos restantes componentes celulares deste modo, não é "utilizável" quando é insolúvel. Após o isolamento, o álcool é removido eo DNA deve ser devolvido a um tampão biológico, como o tris, para ser usado.

Faça você mesmo

Embora a extração do DNA seja comumente feita em laboratórios de pesquisa geralmente usando um dos vários kits comercialmente disponíveis, qualquer um pode fazer extração de DNA em casa usando utensílios domésticos comuns e ervilhas ou espinafre. Neste caso, o tris, ou qualquer tampão biológico, não está presente para proteger o DNA dos desvios do pH. No entanto, é uma maneira visual de ajudar os alunos a se conectarem com o DNA celular.