O DNA no lisado celular se torna visível através de um processo chamado
precipitação , onde o DNA é separado do restante dos componentes celulares e depois tornado visível. Aqui está um colapso:
1. Lise celular: * As células estão abertas, liberando seu conteúdo, incluindo DNA.
* Isso pode ser feito usando vários métodos, como:
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detergentes: Interrompem as membranas celulares e libere o conteúdo.
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enzimas: Quebrar as proteínas, permitindo a liberação de DNA.
* Métodos mecânicos: Como sonicação ou batimento de contas, as células fisicamente interrompidas.
2. Remoção de detritos celulares: * Após a lise celular, o lisado contém uma mistura de componentes celulares.
* Para isolar o DNA, outros componentes como proteínas e lipídios precisam ser removidos. Isso pode ser alcançado através de:
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centrifugação: A rotação do lisado em alta velocidade separa os componentes com base na densidade. O DNA geralmente está no sobrenadante.
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Digestão: Enzimas como proteinase K quebram proteínas.
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salga: Adicionar sal ao lisado, que precipita proteínas, mas deixa o DNA em solução.
3. Precipitação do DNA: * O DNA é então precipitado fora da solução, tornando -o visível. Isso geralmente é feito usando
etanol ou
isopropanol .
* Esses álcoois são menos polares que a água, fazendo com que o DNA se agrupe e forme um precipitado visível.
* A adição de
sal pode melhorar ainda mais a precipitação, neutralizando as cargas negativas na molécula de DNA.
4. Visualização: * O DNA precipitado é então coletado, normalmente espalhando -o em torno de uma haste de vidro ou usando uma pipeta.
* O DNA aparece como uma massa branca e pegajosa Porque é altamente enrolado e entrelaçado.
Pontos importantes: *
O processo de isolamento e visualização do DNA pode ser otimizado com base no tipo de célula e no aplicativo pretendido. *
Técnicas e reagentes diferentes podem ser usados dependendo dos requisitos experimentais específicos. *
A visualização também pode ser aprimorada usando técnicas de coloração, como o uso de um corante como o brometo de etídio, que se liga ao DNA e o torna fluoresce em luz sob luz UV. Ao entender o processo de precipitação e visualização do DNA, você pode efetivamente isolar e analisar o DNA de várias fontes.
