Aqui está um colapso das etapas principais na produção de DNA recombinante, junto com alguns pontos importantes:

1. Isolamento do gene de interesse:

* Fonte: O gene desejado é obtido de seu organismo original (por exemplo, bactérias, plantas, animal).
* Métodos : Isso pode envolver:
* Digestão da enzima de restrição: Enzimas específicas cortam o DNA em sequências precisas.
* PCR (reação em cadeia da polimerase): Amplifica um fragmento de DNA específico.

2. Preparação do vetor:

* Escolha do vetor: Um vetor adequado (por exemplo, plasmídeo, vírus) é selecionado. O vetor deve ser capaz de replicar na célula hospedeira.
* Digestão da enzima de restrição: O vetor é cortado com a mesma enzima de restrição usada para o gene de interesse, criando extremidades compatíveis.
* Ligação: O gene de interesse e o vetor aberto são combinados usando o DNA ligase, que sela o DNA novamente.

3. Transformação:

* Introdução na célula hospedeira: O DNA recombinante é introduzido em uma célula hospedeira (por exemplo, bactérias, leveduras).
* Métodos : Os métodos comuns incluem:
* Transformação química: As células são tratadas com produtos químicos que aumentam a permeabilidade ao DNA.
* Eletroporação: Um breve pulso elétrico cria poros temporários na membrana celular.

4. Seleção de células transformadas:

* Genes marcadores: O vetor geralmente carrega genes marcadores (por exemplo, resistência a antibióticos) que permitem a identificação de células que contêm o DNA recombinante.
* Crescimento em meios seletivos: As células são cultivadas em meio contendo o antibiótico. Somente células com o gene marcador sobreviverão e multiplicarão.

5. Produção do produto gene:

* Expressão : As células transformadas são cultivadas em grandes quantidades e o gene de interesse é expresso.
* Produção de proteínas : O DNA do gene é transcrito para o mRNA, que é então traduzido para a proteína desejada.
* purificação (opcional): Se a proteína for o produto desejado, poderá ser purificado para remover outros componentes celulares.

Pontos -chave a serem lembrados:

* Enzimas de restrição: Eles agem como uma tesoura molecular, cortando o DNA em sequências específicas, deixando "pontas pegajosas" que podem parecer base com extremidades compatíveis em outros fragmentos de DNA.
* vetores: São veículos que carregam o gene de interesse para a célula hospedeira. Os plasmídeos são pedaços circulares de DNA que se replicam independentemente em bactérias. Os vetores virais podem integrar o gene ao genoma do host.
* Genes marcadores: Esses genes permitem a seleção de células transformadas.
* Eficiência de transformação: O processo de introdução de DNA estranho nas células não é 100% eficiente. Nem todas as células adotam com sucesso o DNA recombinante.

Deixe -me saber se você quiser mais detalhes sobre qualquer aspecto específico desse processo!