Os cientistas podem decompor ou sequenciar o DNA em seus nucleotídeos constituintes, o que pode, por exemplo, dizer a uma pessoa se ela tem uma doença genética. Métodos comuns de extração de DNA envolvem o uso de isopropanol ou etanol em uma etapa do processo. No entanto, as células contêm muitas outras moléculas como proteínas e lipídios, e os cientistas naturalmente querem uma solução de DNA tão pura quanto possível.
Os métodos de extração de DNA geralmente envolvem várias etapas: as células precisam ser quebradas. , os lipídios de membrana precisam ser removidos, e o DNA precisa ser separado de proteínas, RNA e outros contaminantes. Dois protocolos típicos são a lise alcalina para extração de DNA plasmidial bacteriano e extração com fenol-clorofórmio. Em ambos os métodos, a precipitação com etanol ou isopropanol de ácidos nucleicos é uma das etapas finais. Uma vez que o DNA ou RNA foi precipitado (caído da solução), ele pode ser ressuspenso em água.
Etanol é um bom solvente
Tanto o etanol quanto o isopropanol se misturam bem (são miscíveis com) água, mas eles têm constantes dielétricas menores do que a água, o que significa que sua capacidade de proteger cargas positivas e negativas na solução e mantê-las segregadas é muito mais pobre. A constante dielétrica para a água, por exemplo, é de 78,5, enquanto a constante para o etanol é de 24,3. O DNA é carregado negativamente, por isso é atraído por íons positivos na solução, como potássio ou sódio. Etanol tem uma capacidade mais fraca do que a água para manter os íons carregados positivamente eo DNA à parte.
Etanol aumenta a concentração de DNA O etanol também torna o DNA menos solúvel por outra razão. Como as moléculas de etanol podem formar interações chamadas ligações de hidrogênio com moléculas de água, elas diminuem o número de moléculas de água disponíveis para hidratar o DNA. Entre este efeito e a menor constante dielétrica, o etanol basicamente faz com que o DNA se agregue com íons positivos na solução, formando um sólido ou precipitado no fundo do tubo. Precipitar o DNA serve para torná-lo mais concentrado porque outros contaminantes na solução não são precipitados ao mesmo tempo.
Fatores Adicionais no Processo
A lavagem com etanol também serve para remover o baixo peso molecular contaminantes como sais e detergentes. O sal escolhido pode variar dependendo se é necessário precipitar o detergente dodecilsulfato de sódio (SDS) de um passo anterior; o dodecil sulfato de potássio, por exemplo, é insolúvel e irá precipitar, portanto, o uso de acetato de potássio em uma lise alcalina pode remover o SDS antes que o etanol /isopropanol seja adicionado. O etanol também pode ser usado para precipitar RNA pelas mesmas razões, embora a precipitação de RNA normalmente exija mais etanol.
