A análise do DNA envolve diferentes tipos de experimentos moleculares e procedimentos biológicos. O DNA é uma matéria-prima frágil e complicada, portanto, manipulá-lo e analisá-lo requer a melhor qualidade e a mais pura preparação de produtos químicos. Dependendo da análise, centenas de produtos químicos, desde soluções ácidas e básicas até tampões e corantes, estão envolvidos no estudo do DNA. Entender por que alguns produtos químicos são usados é fundamental para realizar experimentos bem-sucedidos e obter resultados precisos, confiáveis e reproduzíveis.
Ethylenediaminetetraacetate para purificação de DNA
Três tipos de DNA são purificados para o trabalho científico: DNA do genoma (DNA genômico), o DNA inteiro da célula (DNA total) ou de plasmídeos, que podem se auto-multiplicar. A purificação de DNA de célula total usa substâncias químicas que permitem a destruição de muitas membranas de uma célula durante a lise celular. O etilenodiaminotetraacetato químico (EDTA) é freqüentemente usado para remover íons de magnésio, que são necessários para manter a rigidez das paredes das células, fazendo com que elas enfraqueçam ao ponto de colapsar ou rasgar, liberando o conteúdo da célula e o DNA para análise. Além disso, o EDTA protege e preserva a integridade do DNA inibindo enzimas que estão normalmente presentes na célula, que podem fragmentar o DNA e torná-lo inutilizável.
Cloreto de magnésio para amplificação de DNA
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é um sofisticado método de análise usado para amplificar vários milhares de cópias de uma molécula de DNA, no entanto, é repleto de problemas técnicos e imprecisões. Muitos cientistas, portanto, rotineiramente executam vários conjuntos diferentes de PCRs para encontrar a condição e os parâmetros mais ideais para um gene particular de interesse. Um produto químico usado para realizar tal otimização é o magnésio, que estabiliza a enzima DNA polimerase usada na PCR e atua como um co-fator essencial para a atividade da enzima. Para PCRs, magnésio é usado na forma de um tampão de cloreto de magnésio.
Brometo de etídio para coloração de DNA
O brometo de etídio é um corante que se liga ao DNA, deslizando entre os nucleotídeos que compõem uma dupla hélice de DNA em um processo conhecido como intercalação. Este corante pode então ser iluminado com uma lâmpada ultravioleta, para que o DNA ao qual o brometo de etídio foi ligado possa ser visualizado. No entanto, pelo menos 1 nanograma de ADN é necessário para o brometo de etídio ser visto adequadamente, portanto, é uma maneira de detectar o DNA amplificado por PCR. Embora barato e amplamente utilizado, é também um produto químico mutagênico conhecido por causar câncer, por isso seu uso em laboratórios é altamente regulado e muitos cientistas estão adotando alternativas menos tóxicas.
