A clonagem TA é um método simples e conveniente de subclonar produtos da reação em cadeia da polimerase (PCR). "TA" é a abreviação de "timina" e "adenina". Esta técnica de clonagem utiliza a capacidade da timina para hibridar com adenina na presença de ligases. As enzimas de restrição não são utilizadas, ao contrário do método tradicional de subclonagem. Em vez disso, os produtos de PCR são amplificados usando enzimas Taq polimerases.

Método

O método de clonagem TA usa a atividade terminal-transferase de certa saliência de ácido desoxirribonucleico em cada extremidade do produto de PCR. Um vector de clonagem linearizado com um único, três prime-T (3'-T) saliências chamado de T-vector é usado para clonar este produto de PCR em um vetor plasmídeo. O produto de PCR é misturado com este vetor em alta proporção.

DNA ligase (ligase T4) é adicionado à mistura, o que permite que os dois produtos se hibridem e se juntem.

Vantagens e Desvantagens

A clonagem TA é um método conveniente para subclonar produtos de PCR no vetor linearizado, e é muito mais simples e rápido que os métodos tradicionais de subclonagem. Como este método não utiliza enzimas de restrição, produtos sem sítios de enzimas de restrição podem ser clonados.

Uma desvantagem é que os kits de clonagem TA são muito caros e, portanto, seu uso é limitado. Além disso, não há clonagem direcional; então a probabilidade de clonagem em uma direção oposta é maior.

Kits de clonagem TA

Vários fabricantes vendem kits de clonagem TA. Alguns são Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft.