Os químicos usam cromatografia líquida de alta eficiência, ou HPLC, para separar misturas de compostos. Em geral, o método consiste em injetar uma amostra em uma coluna onde ele se mistura com um ou mais solventes. Diferentes compostos adsorvem, ou "grudam", na coluna em diferentes graus; e quando o solvente empurra os compostos através da coluna, um dos componentes da mistura sai da coluna primeiro. O instrumento detecta os compostos quando eles saem da coluna e produz um cromatograma que consiste em um gráfico com tempo de retenção no eixo x e intensidade de sinal do detector no eixo y. Quando os compostos saem da coluna, eles produzem "picos" no cromatograma. Em geral, quanto mais afastados e mais estreitos os picos no cromatograma, maior a resolução. Os cientistas consideram uma resolução de 1,0 ou superior para representar uma separação adequada.
Meça as larguras de dois picos adjacentes no cromatograma observando onde os valores do eixo x estão na base de cada pico. O eixo x representa o tempo de retenção, geralmente medido em segundos. Assim, se um pico começa em 15,1 segundos e termina em 18,5 segundos, sua largura é (18,5 - 15,1) \u003d 3,4 segundos.
Determine os tempos de retenção anotando a hora, ou seja, a localização no x- eixo, que corresponde às localizações dos máximos dos picos. Esse valor normalmente estará na metade do caminho entre os dois valores usados para calcular a largura na etapa 1. O exemplo da etapa 1, por exemplo, exibirá um máximo em cerca de 16,8 segundos.
Calcule a resolução, R , entre dois picos por
R \u003d (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],
em que RT1 e RT2 representam os tempos de retenção dos picos 1 e 2, e W1 e W2 representam as larguras dos picos obtidos em suas bases. Continuando o exemplo das etapas 2 e 3, um pico exibe um tempo de retenção de 16,8 segundos e uma largura de 3,4 segundos. Se o segundo pico exibisse um tempo de retenção de 21,4 segundos com uma largura de 3,6 segundos, a resolução seria
R \u003d (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] \u003d 4,6 /3,5 \u003d 1,3.
