A principal razão pela qual você mancha uma amostra antes de colocá-la no microscópio é para vê-la melhor, mas a coloração faz muito mais do que simplesmente destacar os contornos das células. Algumas manchas podem penetrar nas paredes celulares e destacar os componentes celulares, e isso pode ajudar os cientistas a visualizar processos metabólicos. As manchas também ajudam a distinguir entre células vivas e células mortas. Além disso, a coloração permite aos cientistas contar o número de células de um tipo específico dentro de uma determinada biomassa. Existem vinte ou mais tipos diferentes de manchas, e cada uma tem seu objetivo.
TL; DR (muito longo; não leu)
O principal objetivo da mancha é destacar as células e partes de células. Existem mais de 20 tipos diferentes de manchas e o tipo de mancha que você usa depende do que você está procurando.
Tipos de manchas
A escolha da mancha depende do que você está procurando. Nem todas as manchas são adequadas para células vivas, mas as que incluem marrom Bismarck, vermelho tolueno, azul Nilo e vermelho Nilo e certas lâmpadas fluorescentes usadas para destacar o DNA. Algumas manchas destacam os esporos, outras detectam lipídios e proteínas e outras mudam de cor na presença de amidos. O objetivo do exame determina o melhor tipo de mancha a ser usada. Por exemplo, um médico que realiza um esfregaço de PAP usaria a Eosina Y. É um corante fluorescente ácido que fica vermelho quando entra em contato com os glóbulos vermelhos, o citoplasma e as membranas celulares. Também é usado para testar a medula sanguínea.
Em alguns casos, um investigador pode usar mais de uma mancha. Por exemplo, a hematoxilina é uma mancha que torna os núcleos das células azuis. Quando usado em conjunto com a eosina, que torna as outras partes da célula vermelhas ou rosadas, proporciona um contraste mais forte e facilita a diferenciação dos núcleos. Manchas de PAP e amostras de medula sangüínea são mais fáceis de examinar quando essas duas manchas são usadas juntas.
Gram: Os trabalhadores do hospital usam a coloração de Gram para identificar bactérias nocivas. Na verdade, é uma série de corantes que têm efeitos diferentes em diferentes tipos de bactérias e fornecem aos médicos uma importante ferramenta de diagnóstico. A mancha de Gram é um processo de três partes. No primeiro, é adicionado o violeta de cristal de Hucker, que mancha todas as bactérias com uma cor violeta uniforme. Na próxima etapa, é adicionada a mancha de iodo, que faz com que a cor adira às células Gram-positivas, que são principalmente Staphylococcus e Streptococcus. A mancha é lavada, deixando as células Gram-positivas com uma cor violeta distinta; então, uma terceira mancha, Safranine O, é introduzida para aumentar o contraste entre as bactérias Gram-negativas e o restante do material da lâmina.
Procedimento de coloração
Ao preparar uma amostra em uma lâmina, você pode montá-lo a seco ou a úmido, cortá-lo em uma seção fina ou borrá-lo. Ao usar uma mancha, o procedimento usual é montar a amostra úmida, o que significa colocar uma gota de água na lâmina, colocar a amostra na água e cobri-la com uma lamínula. Em seguida, aplique a mancha em um canto da lâmina com um conta-gotas e permita que ela seja atraída em direção à amostra por ação capilar. Ajuda a colocar uma toalha de papel no lado oposto da lâmina para atrair a água. Depois que a mancha se espalhar por toda a lâmina, a amostra estará pronta para exame.
