Para preparar um tampão fosfato de pH 7,5, você precisará dos seguintes materiais e reagentes:
Materiais: 1. Água desionizada
2. Dihidrogenofosfato de potássio (KH2PO4)
3. Hidrogenofosfato de sódio (Na2HPO4)
4. Medidor de pH
5. Agitador magnético ou barra de agitação
6. Balão volumétrico (por exemplo, 1000 mL)
7. Cilindro graduado ou pipeta
Reagentes: 1. Solução 0,2 M de dihidrogenofosfato de potássio (KH2PO4):Dissolva 17,41 g de KH2PO4 em 1000 mL de água deionizada.
2. Solução 0,2 M de hidrogenofosfato de sódio (Na2HPO4):Dissolva 28,48 g de Na2HPO4 em 1000 mL de água deionizada.
Procedimento: 1. Calcule os volumes de soluções de KH2PO4 0,2 M e Na2HPO4 0,2 M necessários para preparar 1.000 mL de tampão fosfato 0,1 M em pH 7,5. Use a equação de Henderson-Hasselbalch:
pH =pKa + log ([A-]/[HA])
onde:
- pH é o pH desejado (7,5)
- pKa é a constante de dissociação do ácido fosfórico (7.21)
- [A-] é a concentração da base conjugada (Na2HPO4)
- [HA] é a concentração do ácido fraco (KH2PO4)
Reorganizando a equação e substituindo os valores:
log ([A-]/[HA]) =pH - pKa =7,5 - 7,21 =0,29
[A-]/[HA] =antilog (0,29) =1,959
A partir da concentração de tampão desejada (0,1 M) e da razão calculada ([A-]/[HA]), determine os volumes de soluções 0,2 M KH2PO4 e 0,2 M Na2HPO4:
V (KH2PO4) =[HA] / [Concentração Total] * Volume Total
=0,1 M / (0,1 M + 0,1 M) * 1000 mL
=500ml
V (Na2HPO4) =[A-] / [Concentração Total] * Volume Total
=0,1 M / (0,1 M + 0,1 M) * 1000 mL
=500ml
2. Transfira 500 mL de solução de KH2PO4 0,2 M para um balão volumétrico de 1000 mL.
3. Adicione 500 mL de solução de Na2HPO4 0,2 M ao balão volumétrico.
4. Agite suavemente o frasco para misturar as soluções.
5. Verifique o pH do tampão usando um medidor de pH. Ajuste o pH para 7,5 adicionando pequenos volumes de soluções 0,2 M KH2PO4 ou 0,2 M Na2HPO4 conforme necessário.
6. Se necessário, adicione água deionizada para elevar o volume final do tampão até 1.000 mL.
7. Misture bem o tampão usando um agitador magnético ou uma barra de agitação.
Seu tampão fosfato 0,1 M de pH 7,5 está pronto para uso. Armazene o buffer na temperatura apropriada para suas condições experimentais.
