A cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) é uma técnica de laboratório usada para separar e identificar compostos. É um tipo de cromatografia em coluna que se baseia em diferentes polaridades de compostos em uma solução para separá-los. A HPLC difere da cromatografia de coluna padrão porque usa pressão para forçar a solução através da coluna mais rapidamente e, portanto, produz resultados mais rápidos e, às vezes, mais precisos. O objetivo é separar os compostos na coluna e fazer com que eles saiam separadamente.

Coelution

Devido à velocidade da HPLC e à dependência de diferentes polaridades de compostos, dois compostos com estrutura e polaridades semelhantes pode sair do aparelho de cromatografia ao mesmo tempo ou quase ao mesmo tempo. Isso é conhecido como coeluição. Coelution faz a determinação exata de qual porção da mistura eluiu em que ponto difícil.

Compostos adsorvidos

HPLC normalmente usa uma coluna de vidro cheia de contas feitas de diferentes materiais. As misturas sendo forçadas através da coluna têm substâncias químicas que se ligam com diferentes forças às contas. A força da ligação, que depende da similaridade na polaridade, determina quanto tempo a substância química se ligará à pérola antes de ser liberada. Alguns compostos ligam-se tão fortemente que essencialmente nunca são liberados das contas na coluna e nunca são medidos na solução que sai da coluna.

Custo

Técnicas típicas de separação de laboratório envolvem o desenvolvimento de um ensaio, ou método de separação e, em seguida, implementar esse ensaio para separar compostos individuais de uma solução. No entanto, isso geralmente resulta em várias soluções que também precisam passar por procedimentos, levando a um aumento exponencial da complexidade. Embora a HPLC geralmente possa simplificar e acelerar esse processo, o custo de desenvolvimento de um aparelho de HPLC pode se tornar tremendo. O desenvolvimento de um aparelho de HPLC, embora muito mais eficiente, é muito mais caro do que o desenvolvimento de outros ensaios para a separação de compostos. Isso não o torna financeiramente viável para muitos pequenos laboratórios privados.

Complexidade

A HPLC não é usada apenas para separar compostos simples, ela também é usada para isolar proteínas específicas de uma mistura celular. Neste caso, as contas na coluna são geralmente revestidas com um anticorpo específico para a proteína que você precisa coletar. As proteínas ligam os anticorpos e a solução restante é passada através da coluna, então as proteínas são liberadas usando outra solução e coletadas. Isso requer que um técnico altamente qualificado monitore a coluna o tempo todo e certifique-se de que o processo está sendo executado exatamente como planejado.