FerriTagging de uma proteína chamada HIP1R em fossas revestidas de clatrina. A marcação de HIP1R pode ser rastreada por microscopia de luz e microscopia eletrônica. A localização da ferritina é mostrada por pontos vermelhos na cava. Crédito:University of Warwick
Cientistas da Universidade de Warwick criaram uma nova maneira de ver as proteínas que estão dentro das células humanas.
Usando Ferritina, uma grande camada de proteína que nossas células usam para armazenar ferro, os pesquisadores descobriram um método que chamaram de FerriTag que permite que um microscópio eletrônico (EM) visualize proteínas precisamente ao contrário dos métodos atuais. O método permitiu que os cientistas capacitassem a célula a fazer a própria etiqueta evitando danos causados pela colocação do lado de fora da célula.
O artigo FerriTag é uma nova etiqueta indutível codificada geneticamente para microscopia de luz-elétron correlativa publicada na revista. Nature Communications .
A equipe decidiu localizar com precisão uma proteína encontrada em poços revestidos de clatrina. São pontos de entrada de 100 nm usados por vírus para invadir células e infectá-las. Usando FerriTag, a equipe foi capaz de ver onde a proteína é encontrada no poço e na face interna da superfície da célula.
A equipe foi liderada pelo Dr. Stephen Royle Professor Associado e Senior Cancer Research UK Fellow na Warwick Medical School. Ele disse:"As proteínas fazem quase todas as funções nas células que os cientistas querem estudar. Podemos aprender muito sobre como as proteínas funcionam simplesmente observando-as no microscópio. Mas precisamos saber sua localização precisa".
Embora a microscopia de luz possa ser usada para visualizar o movimento das proteínas, a resolução é baixa, portanto, ver a localização precisa de uma proteína é impossível. Isso pode ser superado usando microscopia eletrônica, que oferece uma resolução mais alta.
Para permitir que as proteínas sejam visualizadas por ambos os microscópios e correlacioná-las, a equipe de pesquisa desenvolveu um método de etiquetar as proteínas para que possam ser vistas por ambos os tipos de equipamentos.
A etiquetagem é amplamente utilizada e várias etiquetas estão disponíveis, no entanto, elas estabeleceram desvantagens; alguns não são precisos o suficiente, ou eles não funcionam em proteínas individuais. Para superar isso, o laboratório do Dr. Royle criou uma nova etiqueta e a fundiu com uma proteína fluorescente. A equipe do Dr. Royle chamou a nova técnica de FerriTag porque é baseada na ferritina, que pode ser vista por um microscópio eletrônico porque o ferro espalha os elétrons.
Dr. Royle disse que seu laboratório teve que derrotar outro obstáculo:"Quando a ferritina é fundida a uma proteína, acabamos com uma papa. Então, alteramos a ferritina para que pudesse ser anexada à proteína de interesse usando uma droga.
"Isso significa que poderíamos colocar o FerriTag na proteína que desejamos obter em alguns segundos.
"O legal do FerriTag é que ele é geneticamente codificado. Isso significa que obtemos a célula para fazer a própria etiqueta e não precisamos colocá-la de fora, o que danificaria a célula."