Bioquímicos e biólogos moleculares usam eletroforese para separar macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos. Isso permite que os cientistas isolem e analisem proteínas individuais ou seqüências de ácido nucléico em uma mistura complexa. Um exemplo típico de eletroforese no laboratório é um microbiologista que usa a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para separar fragmentos de DNA produzidos em uma comunidade microbiana. Independentemente do objetivo, a eletroforese sempre requer o uso de uma solução tampão.
TL; DR (muito longo; não lidos)
A eletroforese separa macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos por tamanho, cobrar e outras propriedades. Para eletroforese que separa por carga, os cientistas usam buffer para transmitir essa carga através do gel. O tampo tambm mantm o gel a um pH estvel, minimizando as alteraes que podem ocorrer na protena ou no cido nucleico se sujeito a pH instvel.
Princpios de electroforese
Electroforese separa molculas ao longo de um gradiente baseado em seu tamanho, carga ou outras propriedades. Esse gradiente pode ser um campo elétrico ou, no caso da Eletroforese em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE), um desnaturante tal como uma mistura de ureia e formamida. As proteínas migrarão para o ânodo se forem carregadas negativamente e o catodo se estiver carregado positivamente. Como moléculas maiores migram mais lentamente que moléculas menores, os cientistas podem medir a distância percorrida e usar logaritmos para determinar o tamanho dos fragmentos.
Eletroforese em gel de gradiente desnaturante
Com o DGGE, o DNA se move ao longo de gradiente de poder desnaturante crescente até que o poder seja suficiente para desnaturar, ou desdobrar, aquele fragmento de DNA em particular inteiramente. Neste ponto, a migração é interrompida. Os cientistas podem usar esse método para separar fragmentos com base em sua suscetibilidade individual à desnaturação.
O que o tampão faz
No caso da eletroforese que se separa com base na carga, os íons no buffer transmitem a carga necessária para a separação. O tampão, ao fornecer um reservatório de ácido e base fracos, também mantém o pH dentro de um intervalo estreito. Isso é importante porque a estrutura e a carga de uma proteína ou ácido nucléico mudará se submetida a mudanças significativas de pH, evitando assim a separação adequada.
Tampões Típicos
Diferentes tampões são ideais para manter a eletroforese gel em diferentes faixas de pH desejadas. Tampões típicos utilizados pelos cientistas para este fim incluem ácido acético, ácido bórico, ácido fosfórico e ácido cítrico, bem como glicina e taurina. Geralmente, o valor de pKa (constante de dissociação ácida) deve estar próximo do pH requerido. É preferível para nós buffers que fornecem uma baixa magnitude de carga para não conduzir muita corrente.
