Uma das formas clássicas de determinar a concentração de micróbios em uma amostra é diluir a amostra, cultivar os micróbios em placas e contar as colônias. Os micróbios banhados crescem de uma unidade formadora de colônias consistindo de uma ou mais células em uma colônia visível que pode ser vista e contada. As bactérias são o micróbio mais comum para avaliar a contagem de placas. As contagens de colônias são usadas para detectar e contar micróbios no solo, água e comida. Protocolos para contagem de colônias enfatizam uma abordagem precisa e metódica.

Diluição de amostras, plaqueamento e incubação

Se você simplesmente manchar uma amostra de micróbio em uma placa de ágar, você verá tantos formadores de colônias unidades que as colônias individuais se misturam, tornando-as impossíveis de contar. Para resolver este problema, misture a amostra num meio líquido, retire uma pequena quantidade dessa mistura e dilua-a ainda mais. Repita este processo de seis a dez vezes. Espalhe a diluição final em uma placa de ágar e incube-a por quatro a sete dias antes de contar as colônias.

Contagem manual

O principal truque na contagem de colônias é contar cada ponto colônia uma vez. Uma abordagem é definir a placa de Petri em um fundo de grade e contar as colônias em cada célula da grade, movendo-se em um padrão metódico através de todas as células. Marcando colônias contadas na parte de trás da placa de Petri também pode ser uma abordagem útil. Geralmente, você precisará contar pelo menos três placas; use apenas placas contendo 30 a 300 colônias para fazer inferências robustas, sugere a Microbiology Network, uma empresa que fornece serviços de consultoria para laboratórios e fabricantes. Placas com colônias que são numerosas demais para contar ou com poucas colônias precisam ser re-plaqueadas a partir de uma nova diluição.

Contagem automatizada

O erro humano aumenta o tempo envolvido na contagem manual de colônias . Para melhorar a precisão e eficiência, coloque a placa de Petri em um dispositivo automático de contagem de colônias. Os contadores automáticos de colônias obtêm uma imagem do prato, separam as colônias do fundo e usam um algoritmo para contar as colônias na placa. Os algoritmos podem ter dificuldades para diferenciar as colônias quando duas ou mais colônias estão tocando nas bordas, portanto esta é uma área de desenvolvimento de software em andamento.

Tornando a contagem mais complicada

A precisão do cálculo da densidade microbiana de contagens de colônia tem algumas limitações. Unidades formadoras de colônias podem ser uma única célula, uma cadeia de células ou um aglomerado de células. A suposição é que uma colônia representa uma célula, então as concentrações calculadas a partir da contagem de colônias podem ser baixas. Micróbios diferentes precisam de condições de crescimento diferentes, e as colônias na placa representam apenas os micróbios que crescem nesses meios de crescimento sob essas condições de incubação. Além disso, a contagem de colônias não registra células mortas, uma consideração importante quando você precisa da concentração de células na amostra original.