p O novo teste de fluxo lateral Vigilant é mais barato, mais fácil de usar e tão confiável quanto o teste PCR padrão ouro atual para o diagnóstico de infecção por SARS-CoV-2. p Um teste de fluxo lateral SARS-CoV-2 que combina duas enzimas bacterianas com sequências genéticas e um par de sondas é mais barato e mais fácil de usar do que os testes de PCR, embora produza resultados comparativamente confiáveis. Chamado Vigilant e projetado pela KAUST, o teste pode detectar quantidades muito pequenas de RNA viral em uma amostra.

p "Vários tipos de testes de fluxo lateral estão atualmente disponíveis ou em pesquisa para detectar SARS-CoV-2, "diz o estudante de Ph.D. da KAUST, Tin Marsic." Dependendo de como eles funcionam, todos eles têm desvantagens, incluindo a detecção do vírus apenas alguns dias após a infecção ou a produção de resultados falsos positivos e falsos negativos. "Testes de PCR, que são realizados em laboratórios, produzem resultados mais confiáveis, mas são caros e requerem equipamentos sofisticados e pessoal qualificado.

p "O Vigilant pode ser conduzido em ambientes não laboratoriais e é significativamente mais barato e fácil de usar do que os testes de PCR, "diz Marsic.

p A primeira etapa crítica da plataforma Vigilant envolve uma técnica chamada amplificação da polimerase de transcrição reversa-recombinase (RT-RPA) para fazer muitas cópias de uma região específica no genoma SARS-CoV-2, se existir na amostra de esfregaço do nariz e da garganta de uma pessoa. Os testes de PCR também amplificam as sequências de genes virais em amostras, mas envolvem colocar as amostras em vários ciclos de alta e baixa temperatura. O RT-RPA pode ser feito à temperatura ambiente com equipamento muito mais barato e fácil de usar.

p Quaisquer genes amplificados por SARS-CoV-2 no produto desse processo são marcados com uma molécula chamada biotina, em seguida, adicionado a um tubo de ensaio contendo o complexo de detecção especialmente projetado da KAUST.

p Este complexo é formado por duas enzimas. Por um lado, uma enzima bacteriana chamada Cas9 é conjugada com um guia de RNA que apenas reconhece e se liga à sequência do gene SARS-CoV-2 correspondente. Na outra extremidade, outra enzima bacteriana chamada VirD2 está ligada a uma sequência de nucleotídeos com marcação fluorescente.

p Gotas da reação entre o complexo e o produto RT-RPA são então adicionadas a uma tira de teste de fluxo lateral impregnada com uma proteína de reconhecimento de biotina chamada estreptavidina em uma extremidade e um anticorpo de reconhecimento de sonda fluorescente na outra. Se a amostra contém sequências do gene SARS-CoV-2, eles terão se ligado ao complexo VirD2-Cas9. Um resultado positivo ocorre quando duas linhas visíveis aparecem. A primeira linha é onde a biotina no amplicon SARS-CoV-2 se liga à estreptavidina. A segunda linha é onde a etiqueta fluorescente na outra extremidade do complexo se liga ao anticorpo da tira. Um resultado negativo aparece apenas como uma única linha causada pela ligação da etiqueta fluorescente ao anticorpo.

p "Agora estamos trabalhando para tornar nossa plataforma Vigilant mais amigável, combinando-a com uma técnica de amplificação ainda mais simples, "diz o bioengenheiro da KAUST Magdy Mahfouz, quem liderou a pesquisa. "Também estamos trabalhando na produção de outros testes de diagnóstico rápidos e eficientes que podem detectar ácidos nucleicos para permitir testes de ponto de atendimento para patógenos, incluindo vírus e marcadores de doenças. "