Novo, ferramenta de nanotubo de carbono para detecção e identificação de vírus ultrassensível
p Imagem do microscópio eletrônico de varredura (barra de escala, 200 nm) do vírus da gripe aviária H5N2 (roxo) preso dentro do nanotubo de carbono alinhado. Crédito:Penn State University
p Uma nova ferramenta que usa uma matriz semelhante a uma floresta de nanotubos de carbono alinhados verticalmente que podem ser ajustados para capturar vírus seletivamente por seu tamanho pode aumentar o limite de detecção de vírus e acelerar o processo de identificação de vírus emergentes. A pesquisa, por uma equipe interdisciplinar de cientistas da Penn State, é publicado em 7 de outubro, Edição 2016 da revista
Avanços da Ciência . p "Detectar vírus no início de uma infecção, antes que os sintomas apareçam, ou de amostras de campo, é difícil porque a concentração dos vírus pode ser muito baixa, muitas vezes abaixo do limite dos métodos de detecção atuais, "disse Mauricio Terrones, professor de física, química, e ciência e engenharia de materiais na Penn State, e um dos autores correspondentes da pesquisa. "A detecção precoce é importante porque um vírus pode começar a se espalhar antes de termos a capacidade de detectá-lo. O dispositivo que desenvolvemos nos permite capturar e concentrar os vírus de forma seletiva por seu tamanho - menor do que células humanas e bactérias, mas maior do que a maioria das proteínas e outras macromoléculas - em amostras incrivelmente diluídas. Além disso, aumenta nossa capacidade de detectar pequenas quantidades de um vírus em mais de cem vezes. "
p A equipe de pesquisa desenvolveu e testou um pequeno, dispositivo portátil que aumenta a sensibilidade da detecção de vírus ao capturar e concentrar os vírus em uma série de nanotubos de carbono. Amostras diluídas coletadas de pacientes ou do ambiente são passadas por um filtro para remover partículas grandes, como bactérias e células humanas, em seguida, através da matriz de nanotubos de carbono no dispositivo. Os vírus ficam presos e se acumulam em concentrações utilizáveis dentro da floresta de nanotubos, enquanto outras partículas menores passam e são eliminadas. O vírus concentrado capturado no dispositivo pode então ser submetido a um painel de testes para identificá-lo, incluindo diagnóstico molecular por reação em cadeia da polimerase (PCR), métodos imunológicos, isolamento de vírus, e sequenciamento do genoma.
p Ilustração do enriquecimento de vírus baseado em tamanho pela matriz de nanotubos de carbono alinhados. Crédito:Penn State University
p "Como nosso dispositivo isola e concentra vírus puramente por tamanho, podemos capturar vírus sobre os quais não sabemos nada biologicamente - não precisamos de nenhum anticorpo ou outro rótulo molecular, "disse Terrones." Assim que capturarmos e concentrarmos o vírus, podemos então usar outras técnicas, como sequenciamento do genoma completo, para caracterizá-lo. "
p "A maioria dos surtos virais letais nas últimas duas décadas foram causados por vírus emergentes. Esta tecnologia de enriquecimento de vírus baseada em tamanho pode ser particularmente poderosa na identificação de vírus emergentes e descoberta de novos vírus que não têm anticorpos e informações de sequência disponíveis, "disse Si-Yang Zheng, professor associado de engenharia biomédica na Penn State, o outro autor correspondente no artigo. "Nossa nova tecnologia não apenas enriquece os vírus em pelo menos cem vezes, mas também remove contaminantes do hospedeiro e ambientais, e permite a identificação direta de vírus por sequenciamento de próxima geração a partir de amostras coletadas em campo sem cultura de vírus. "
p Vírus - como gripe, HIV / AIDS, Ebola, e Zika - pode causar súbito, surtos imprevisíveis que levam a graves crises de saúde pública. As técnicas atualmente disponíveis para isolar e identificar os vírus que causam esses surtos são lentas, caro, e usar equipamentos e reagentes que podem ser caros, volumoso, e requerem armazenamento especializado. Adicionalmente, muitos surtos recentes foram causados por vírus emergentes, para os quais não há maneiras estabelecidas de isolá-los seletivamente para identificação e caracterização.
p Distância inter-tubular ajustável de nanotubos de carbono para correspondência de dimensões de vírus - Barras de escala, 100 nm superior médio 10 μm inferior 200 nm. Crédito:Penn State University
p “Desenvolvemos a tecnologia para fazer crescer uma floresta de nanotubos e podemos controlar a distância entre os troncos, "disse Zheng." A distância entre os tubos pode variar de cerca de 17 nanômetros a mais de 300 nanômetros para capturar vírus seletivamente. As propriedades únicas da floresta de nanotubos de carbono nos permitem integrá-la em um escalável, e microdispositivos portáteis que podem ser adaptados para uso em campo sem a necessidade de instrumentos volumosos e armazenamento especializado de reagentes. "
p Os pesquisadores validaram a capacidade de seu dispositivo recém-desenvolvido de capturar vírus de amostras diluídas usando concentrações conhecidas de vírus previamente identificados, bem como amostras de campo de vírus emergentes e desconhecidos. “Desenvolvemos uma plataforma portátil para enriquecer e isolar vírus com base em seus tamanhos físicos, "disse Yin-Ting Yeh, pesquisador de pós-doutorado na Penn State e primeiro autor do artigo. "Esta abordagem baseada em tamanho ajustável fornece enriquecimento rápido de vírus diretamente de amostras de campo sem o uso de anticorpos. O dispositivo permite a detecção precoce de doenças emergentes e potencialmente permite o desenvolvimento de vacinas muito mais cedo no processo de um surto."