A cromatografia líquida de alta eficiência é uma técnica para a análise laboratorial de uma mistura. É um tipo eficiente de cromatografia que usa alta pressão, em vez de simplesmente gravidade, para impulsionar uma amostra de uma mistura através de uma coluna. Uma amostra é injetada, então uma bomba contendo altas quantidades de pressão ajuda a mover a amostra ao longo de uma coluna empacotada, onde ela é separada em componentes individuais. Esta separação é então analisada por um detector para produzir resultados.

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Para ser injetado em uma HPLC, uma amostra deve primeiro ser dissolvida em um solvente líquido polar, de preferência um com espectros de HPLC conhecidos, para que os seus dados possam ser distinguidos dos da amostra. A solução líquida contendo a amostra é colocada no instrumento e enviada para a coluna. A localização real do local da injeção depende da marca dos instrumentos. Na maioria dos casos, o processo de injeção é automatizado, mas em alguns casos um técnico de laboratório deve injetar a amostra usando uma pequena agulha de seringa.

Componente da bomba

O componente da bomba da unidade de HPLC é necessário porque fornece a pressão que impulsiona a amostra através da coluna. A força da bomba varia, mas uma força poderosa pode produzir uma pressão de até 6.000 psi, ou libras por polegada quadrada, que é aplicada após a amostra ser injetada. Isso permite que a amostra passe pela coluna com mais rapidez e eficiência do que se ela pingasse usando apenas a força da gravidade.

Descrição da coluna

A velocidade aumentada de uma amostra passou pelo coluna por uma bomba permite o uso de um tipo diferente de coluna do que aqueles usados ​​em cromatografia líquida simples. O material de empacotamento na coluna pode ter um tamanho de partícula muito menor, o que aumenta a área de superfície e, portanto, auxilia as interações da amostra com a coluna. A maioria das colunas de HPLC funciona através da polaridade. A amostra é dissolvida em um solvente polar, e a coluna é composta de hidrocarbonetos amplamente não-polares. As partes polares da molécula de amostra passam pela coluna muito rapidamente porque estão interagindo primariamente com o solvente, enquanto os componentes não polares da amostra permanecem na coluna, formando interações fracas com os componentes da coluna. Portanto, os componentes da amostra saem da coluna na ordem da polaridade para a maioria dos não-polares.

Função do detector

Os detectores também variam com base no tipo de instrumento de HPLC que está sendo usado. No entanto, a maioria funciona da mesma maneira básica. Uma fonte de luz ultravioleta brilha nos componentes separados da amostra à medida que saem da coluna. A maioria dos compostos orgânicos absorve uma certa quantidade de luz, de modo que, ao passar pelo feixe de luz aplicado, um detector pode captar a quantidade de luz absorvida. O detector também registra o tempo de retenção dos componentes com base na ordem em que eles saem da coluna. Essa saída pode ser analisada com base na área do pico para determinar a natureza exata dos componentes da amostra.