Os químicos freqüentemente usam um instrumento conhecido como espectrômetro ultravioleta-visível, ou UV-Vis, para medir a quantidade de radiação ultravioleta e visível absorvida pelos compostos. A quantidade de radiação ultravioleta ou visível absorvida por um composto depende de três fatores: a concentração c da amostra; o comprimento do caminho, l, do suporte da amostra, que determina a distância sobre a qual a amostra e a radiação interagem; e o coeficiente de absorção molar, e, às vezes chamado de coeficiente de extinção molar. A equação é declarada como A \u003d ecl e é conhecida como lei de Beer. A equação contém, portanto, quatro variáveis e, para determinar qualquer uma das quatro, requer valores conhecidos para três.
Cálculos

Determine a absorvância do composto no comprimento de onda desejado. Esta informação pode ser extraída do espectro de absorvância produzido por qualquer instrumento UV-Vis padrão. Os espectros são normalmente plotados como absorvância versus comprimento de onda em nanômetros. Geralmente, a aparência de qualquer "pico" no espectro indica os comprimentos de onda de interesse.


Calcule a concentração da amostra em moles por litro, mol /L, também conhecida como molaridade, M. A equação geral para a molaridade é de

M \u003d (gramas de amostra) /(peso molecular do composto) /litros de solução.


Por exemplo, uma amostra contendo 0,10 gramas de tetrafenilciclopentadienona, com um peso molecular de 384 gramas por mole, dissolvidos e diluídos em metanol até um volume final de 1,00 litro, exibem uma molaridade de:
M \u003d (0,10 g) /(384 g /mol) /(1,00 L) \u003d 0,00026 mol /L.


Determine o comprimento do caminho através do porta-amostras. Na maioria dos casos, isso é de 1,0 cm. Outros comprimentos de caminho são possíveis, principalmente quando se lida com porta-amostras destinados a amostras gasosas. Muitos espectroscopistas incluem o comprimento do caminho com as informações da amostra impressas no espectro de absorvância.


Calcule o coeficiente de absorção molar de acordo com a equação A \u003d ecl, onde A é absorvância, c é a concentração em moles por litro l é o comprimento do caminho em centímetros. Resolvida para e, essa equação se torna e \u003d A /(cl). Continuando o exemplo da Etapa 2, a tetrafenilciclopentadienona exibe dois máximos em seu espectro de absorvância: 343 nm e 512 nm. Se o comprimento do caminho foi de 1,0 cm e a absorvância em 343 foi de 0,89, então

e (343) \u003d A /(cl) \u003d 0,89 /(0,00026 * 1,0) \u003d 3423


E para a absorvância de 0,35 a 512 nm,


e (512) \u003d 0,35 /(0,00026 * 1,0) \u003d 1346.