A eletroforese em gel é uma técnica de laboratório comumente usada com muitas aplicações práticas, incluindo impressão digital de DNA e seqüenciamento de genoma. O processo envolve a separação de fragmentos de DNA usando uma corrente elétrica enquanto acompanha a taxa de movimento molecular através de um gel filtrante.

A adição de corante azul ou laranja nas amostras de DNA incolor permite ver sua amostra e obter informações sobre como o DNA moléculas se movem durante a eletroforese. A identificação é baseada no tamanho das bandas de DNA no gel após a migração das moléculas.
Como funciona a eletroforese em gel

A eletroforese em gel puxa fragmentos de DNA através de um gel usando uma corrente elétrica para isolar e identificar moléculas de DNA por tamanho e carga elétrica. O gel geralmente é feito com pó de agarose em pó - um polissacarídeo extraído de algas marinhas.

A agarose é adicionada a uma solução tampão de água e sal, e a mistura é aquecida e resfriada para formar um poroso. gel que atuará como uma matriz de filtragem durante o procedimento de eletroforese. O gel é então colocado em uma unidade de eletroforese e coberto com uma solução tampão que conduz eletricidade.
As soluções contendo DNA e corantes de carregamento são pipetadas em pequenos poços do gel que devem ser feitos durante a preparação do gel. Corantes
ajudam você a ver claramente a amostra que você está adicionando aos poços de gel localizados perto do eletrodo negativo da unidade de eletroforese.

A eletrodo positivo está localizado na extremidade oposta. Um padrão conhecido de fragmentos de DNA é colocado no primeiro poço, criando uma escada de bandas de DNA para fins de comparação e identificação.

O esqueleto fosfato das moléculas de DNA fornece ao DNA uma carga negativa. Os opostos se atraem e, consequentemente, as moléculas de DNA são atraídas para o eletrodo positivo e começam a se mover ou "migrar" quando uma corrente elétrica é ligada.

Fragmentos de DNA de menor tamanho viajam mais rápido que fragmentos maiores porque encontram menos resistência à medida que migram através da matriz porosa do gel. Fragmentos de DNA de tamanhos semelhantes formam bandas de DNA no gel.
Carregando finalidade e importância do corante

O DNA é incolor, portanto, adicionar corantes de rastreamento a uma amostra ajuda a determinar o taxa de movimento
moléculas de proteínas de diferentes tamanhos no gel durante a eletroforese. Exemplos de corantes de carregamento que se movem com a amostra de DNA incluem azul de bromofenol e xileno cianol.

O corante escolhido não deve ser reativo ou alterar o DNA. O azul de bromofenol é um corante usado para rastrear cadeias de DNA de tamanho menor contendo cerca de 400 pares de bases, enquanto o xileno cianol é melhor para cadeias de DNA maiores com até 8.000 pares de bases. O corante escolhido não deve ser reativo ou alterar o DNA.
Papel do glicerol na eletroforese em gel de agarose

Ao preparar sua amostra de DNA para eletroforese, você precisará adicionar glicerol e água junto com os corantes de carregamento. O glicerol é uma substância pesada e xaroposa que dá mais densidade à amostra de DNA antes de ser inserida nos poços em uma extremidade da folha de gel.

Sem glicerol, a amostra de DNA se dispersaria em vez de afundar e formar um camada no poço, como deveria fazer para formar uma escada de DNA.
Tracking Dye na SDS PAGE

Eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio (SDS PAGE) é uma técnica adequada para separar proteínas e aminoácidos , que são menores e mais complexos que as moléculas de DNA linear. A poliacrilamida (gel SDS PAGE) é usada em vez do gel de agarose para eletroforese.

O azul de bromofenol (BPB) é adicionado ao tampão da amostra como um corante de rastreamento que se move na mesma direção da separação proteínas e demarca sua borda principal.
Papel do corante de ligação ao DNA
O corante de ligação ao DNA, como o brometo de etídio cor de laranja e etídio, pode ser adicionado ao gel ou ao tampão de eletroforese. Como o nome sugere, o corante se liga à molécula de DNA.

É necessário muito cuidado ao manusear esse corante mutagênico, pois ele pode se ligar ao DNA nas células da pele. Ao contrário dos corantes de rastreamento, o brometo de etídio fluorescente
sob luz UV, tornando visíveis as faixas de DNA.