Escherichia coli, E. coli, é uma bactéria que cresce no intestino delgado dos mamíferos. Esta bactéria foi descoberta pela primeira vez no final de 1800. Desde então, tem uma longa história de uso em pesquisas científicas. É o organismo mais amplamente utilizado na genética molecular. Parte da razão pela qual E. coli é comumente usada em pesquisas científicas é que é fácil crescer em laboratório. Os fatores que facilitam o crescimento da E. coli são suas necessidades nutricionais simples, rápida taxa de crescimento e suas exigências moderadas de manutenção.

Esterilize a alça de inoculação colocando-a na chama do bico de Bunsen. Passe a metade inferior do loop pela chama até que fique vermelho.

Deixe o loop esfriar. Você pode tocá-lo no agar estéril da placa para garantir que ela tenha esfriado. Não coloque o laço na mesa ou deixe que entre em contato com algo que não seja ágar estéril ou a cultura desejada agora que ele foi esterilizado.

Mergulhe o laço na cultura de E. coli e depois remova-o. >

Abra a placa de ágar e deslize suavemente o anel para frente e para trás na superfície de uma seção do ágar. Tome cuidado para não arranhar o ágar com o laço. O agar fornece os nutrientes que a E. coli precisa para crescer.

Coloque o laço na chama do bico de Bunsen novamente para esterilizá-lo. Uma vez que a vareta de laço esfria, toque-a em uma seção esterilizada da placa para ter certeza de que está fria, então deslize a alça pela primeira vez para dar uma segunda passada. Esta segunda sequência é uma versão diluída da primeira sequência. Repita este processo de esterilização e deslizamento até que várias seções da placa de ágar tenham sido planeadas. A razão pela qual você faz isso é para que você possa escolher mais tarde a partir de colônias clonais únicas. Isso ajudará a garantir que você tenha pelo menos uma seção com colônias individuais - não muito concentradas (que terão crescimento demais e não permitirão que você escolha uma única colônia) e que não sejam muito diluídas (o que não daria colônias)

Esterilize o laço na chama uma última vez antes de colocá-lo na área de trabalho.

Coloque o topo de volta na placa de ágar. Vire a placa de cabeça para baixo e coloque-a na incubadora a 37 graus Celsius (98,6 graus Fahrenheit). Esta temperatura de incubação ideal simula a temperatura do corpo humano onde a E. coli reside. Dentro de 24 a 48 horas, colônias visíveis de bactérias E. coli aparecerão na placa de ágar.

Advertência

A contenção adequada das amostras de E. coli e a esterilização da alça de inoculação reduzirão a chance de espalhar as bactérias. Nenhum alimento ou bebida deve ser consumido na área do experimento. O uso de luvas reduzirá ainda mais o risco de contaminação das mãos.